Optimización de las huellas de DNA obtenidas con RAPDS y MP-PCR mediante la técnica RAMPNR

Abstract

Analizar DNA con PCR ha sido una estrategia de rutina desde la década de los años noventa y se ha utilizado ampliamente con diferentes propósitos, entre ellos en la caracterización, diferenciación e identificación de organismos. La técnica más utilizada es la de RAPDs, pero su reproducibilidad se ha cuestionado entre laboratorios. En el presente trabajo se demuestra el potencial de una técnica no radioactiva basada en PCR que utiliza iniciadores aleatorios y de microsatélites en la misma reacción denominada RAMPnr- PCR (RAMP-PCR no radioactiva), adecuada para fines de genotipificación de plantas. Esta técnica se evaluó en diferentes especies de leguminosas (Cicer arietinum L., Phaseolus vulgaris L., Arachis hypogaea L., Medicago sativa L., Lens esculenta Moench, Vicia faba L., Glycine max L., Pisum sativum L. y Tamarindus indica L.) mostrando patrones más informativos respecto a los obtenidos independiente con RAPDs y MP-PCR. Los productos de RAMPnr se separaron en geles de agarosa y se tiñeron con bromuro de etidio. Algunas de las ventajas que la técnica ofrece son mayor estabilidad y cantidad de huellas detectadas, no requiere marcaje y el costo es equivalente al de las técnicas mencionadas; por lo que RAMPnr-PCR podría ser de gran utilidad en la tipificación de genomas, así como en la búsqueda de marcadores genéticos asociados a características específicas