Detección de pepsinógeno mediante el uso de antisueros y anticuerpos monoclonales.

Abstract

<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial">El pepsinógeno (PGA y PGC) es una aspartato proteasa secretada por células principales gástricas que a pH ácido se convierte en pepsina. Los niveles séricos de dicha enzima se han postulado como indicadores del estado de la mucosa gástrica ya que dependiendo de la patología de base estos pueden encontrarse elevados o disminuidos. Así, en la gastritis superficial y úlcera duodenal los niveles de PGA se encuentran aumentados, mientras que en la gastritis atrófica y cáncer gástrico se encuentran disminuidos. Se planteó como objetivo de este trabajo producir anticuerpos policlonales y monoclonales anti-pepsinógeno con el fin de ser empleados en el diseño de sistemas de cuantificación de pepsinógeno sérico, ya que los sistemas de cuantificación comerciales son muy costosos y de difícil acceso. Para la producción de los anticuerpos se empleó pepsina A porcina como inmunógeno teniendo en cuenta que presenta una alta homología en la secuencia de aminoácidos (86%) con la pepsina A humana y además tienen una estructura secundaria idéntica. Anticuerpos policlonales fueron obtenidos de conejos Nueva Zelanda inmunizados vía subcutánea con pepsina A porcina y los anticuerpos monoclonales a partir de células de bazo de los ratones BALB/c inmunizados con pepsina A vía intraperitoneal. Los anticuerpos tanto policlonales como monoclonales fueron purificados por precipitación con sulfato de amonio y posteriormente cromatografía de intercambio iónico a partir del suero o líquido ascítico respectivamente. Los anticuerpos purificados, tanto policlonales como monoclonales, son capaces de reconocer pepsina porcina y pepsinógeno humano presente en sonicados de biopsias gástricas en ensayos de ELISA y western blot. En ensayos de inmunohistoquímica realizados sobre cortes de biopsias gástricas los anticuerpos monoclonales detectan el pepsinógeno presente en el citoplasma de células principales. Dentro del diseño de sistemas de cuantificación de pepsinógeno se emplearon pruebas de ELISAs tipo competitivo, de inhibición y “sándwich”, así como en pruebas radiométricas. Los ensayos tipo “sándwich” fueron los que brindaron el mayor grado de sensibilidad, logrando generar curvas de calibración empleando diferentes concentraciones de pepsina A porcina, con un limite de detección mínimo de 60 ng/ml de pepsina A. A partir de dicha calibración es posible interpolar los valores de densidad óptica generados por pepsinógeno presente en muestras de suero con el fin de determinar su concentración. Este tipo de pruebas serán de gran utilidad en el seguimiento de pacientes con sintomatología presuntiva de enfermedad gástrica, seleccionando los pacientes que serían sometidos a pruebas invasivas como la endoscopia, disminuyendo así los costos del seguimiento. Por otro lado, concentraciones de pepsinogeno sérico cuantificadas de esta forma, serán relacionadas con títulos de gastrina sérica y anticuerpos anti-Helicobacter pylori dentro del marco del programa de cáncer gástrico del Instituto Nacional de Cancerología.</span></p>