Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban (Nov 2022)

抑制<italic>miR</italic>-<italic>4321</italic>减轻脓毒症相关急性肾脏损伤的作用和机制研究

  • 张春敏,
  • 陈飞燕,
  • 杨文敏,
  • 林永敏,
  • 毛碧涛,
  • 陈洁,
  • 武志远,
  • 梁宇峰

Journal volume & issue
Vol. 43
pp. 928 – 937

Abstract

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目的本研究旨在探讨抑制miR-4321在改善脓毒症相关急性肾损伤（Sepsis associated acute kidney injury， SA-AKI）中的作用和机制。方法采用RT-qPCR方法检测LPS诱导的HK2细胞模型和CLP模型小鼠肾脏组织中miR-3165、miR-4270和miR-4321的表达水平。利用miR-4321-Inhibitor抑制LPS诱导的HK2细胞损伤模型中miR-4321的表达，分别通过CCK-8分析、EdU染色分析和western blotting评估miR-4321对细胞增殖、细胞活力、细胞因子和凋亡相关蛋白水平的影响。利用miR-4321-Antago干预CLP模型小鼠肾组织中miR-4321的表达，通过H&E染色检测肾组织结构变化，比色法检测血清中肌酐和血尿氮水平，ELISA检测血清中白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达，IHC染色检测组织中mTOR水平，western blotting检测肾组织中凋亡相关蛋白表达水平。机制上，使用Targetscan软件预测miR-4321的靶基因，并通过双荧光素酶报告基因实验对靶基因进行验证。结果与对照组相比，LPS诱导的HK2细胞中miR-4321（n=3， t=7.154， P=0.001 3）表达升高；miR-4321-Inhibitor可促进HK2细胞增殖和细胞活力，并降低LPS诱导的IL-1β，IL-6和TNF-α水平的表达。体内实验证明miR-4321-Antago能够抑制CLP小鼠血清中肌酐和血尿氮水平，改善肾组织损伤，降低血清中IL-1β，IL-6和TNF-α水平，促进肾组织mTOR表达，抑制凋亡相关蛋白的表达。此外，mTOR是miR-4321的靶基因之一。结论抑制miR-4321可明显减轻脓毒症相关急性肾损伤，这一作用可能是通过增加mTOR的表达实现的。

Keywords