黏着斑激酶酪氨酸磷酸化在牵拉依赖的细胞形态改变中的作用

Abstract

【目的】探讨黏着斑激酶(FAK)397 和925 位酪氨酸残基(Y397 , Y925)酪氨酸磷酸化在单轴周期性牵拉引起的 细胞形态改变(垂直于牵拉轴方向排列和伸长)中的作用。【方法】用含100 mL/ L 胎牛血清的DMEM 培养大鼠成纤维细胞 3Y1 。利用PCR 法从人的脐静脉内皮细胞获得FAK cDNA 。通过直接点突变, 利用重叠PCR 制成突变的FAK(F397Y, F925Y)。将FAK 突变转染到细胞内, 使细胞遭受牵拉, 牵拉0 min 为对照组, 牵拉5 、10、20 、30、60 min 为牵拉组, 实验重复3 次, 实验数据利用方差分析和多重比较进行分析。然后利用FAKY397 和Y925 磷酸化的特殊抗体进行了免疫印迹实验, 采用 信息分析程序(Mocha , Jandel Scientific)测定免疫印迹的密度, 比较对照组与牵拉组, 检测FAK 酪氨酸磷酸化, 分析细胞形态 改变。【结果】在牵拉反应中, FAKY397 和Y925 的酪氨酸磷酸化水平比对照组明显增高(P <0.05), 并且峰值分别在牵拉 后5 min(2.75±0.51 倍, n =3)和20 min(2.98 ±0.58 倍, n =3)。另一方面, 在突变FAK 转染的细胞中, 牵拉引起的细胞 形态改变被有意义的阻滞了。【结论】牵拉引起的FAK 酪氨酸磷酸化在牵拉依赖的细胞形态改变中起着重要作用。