Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical (Aug 2004)
Polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis of the ITS2 region for differatiation of Brazilian Biomphalaria intermediate hosts of the Schistosoma mansoni Reação em cadeia da polimerase e polimorfismo de tamanho de fragmento de restrição da região do ITS2 para a diferenciação dos moluscos brasileiros do gênero Biomphalaria hospedeiros intermediários do Schistosoma mansoni
Abstract
We sequenced the internal transcribed spacer 2 of the ribosomal DNA (ITS2-DNAr) from the three Schistosoma mansoni intermediate hosts in Brazil: Biomphalaria glabrata, Biomphalaria tenagophila and Biomphalaria straminea. Analysis of a restriction map from those sequences allowed us to select putative restriction enzymes able to identify the snail species under study. Four restriction enzymes were used and HpaII provided simple species-specific profiles easily visualized in polyacrylamide gels. The use of ITS2 is advantageous as it provides a small fragment of 460 bp which may be easily amplified by PCR. In the current work, we showed that the amplification of ITS2-DNAr together with HpaII enzyme restriction is an auxiliary molecular tool for the morphological identification of such snails as well as for taxonomic and phylogenetic studies of neotropical planorbids.O sequenciamento da região espaçadora transcrita interna 2 do DNA ribossomal (ITS2-DNAr) das espécies brasileiras gênero Biomphalaria (B. glabrata, B. tenagophila and B. straminea) hospedeiras intermediárias do Schistosoma mansoni no Brasil, permitiu a análise dos sítios de restrição presentes nestas seqüências. A análise do mapa de restrição obtido dessas seqüências nos permitiu selecionar enzimas mais promissoras que gerassem perfis de restrição capazes de identificar essas espécies. Foram testadas 4 enzimas e a enzima HpaII foi selecionada por produzir perfis espécie específicos de fácil visualização em gel de poliacrilamida. A utilização da região ITS2 tem como vantagens a obtenção de um fragmento pequeno de 460bp, o qual pode ser facilmente amplificado por PCR. Neste trabalho, nos demonstramos que a amplificação da região ITS2-DNAr e a restrição deste com a enzima HpaII é uma ferramenta molecular auxiliar a identificação morfológica desses moluscos, bem como para estudos taxonômicos e filogenéticos de planorbídeos neotropicais.
Keywords
