C23 Composition chimique et activité antimicrobienne sur des souches responsables d’infections cutanées de l’extrait méthanoïque d’écorces de Vernonia conferta (Asteraceae)

Abstract

Introduction : Vernonia conferta est une espèce utilisée par les populations camerounaises dans la prise en charge des plaies. L’objectif de ce travail était de déterminer la composition chimique et d’évaluer les propriétés antimicrobiennes de cette plante. Méthodologie : Nous avons mené une étude expérimentale. Le matériel végétal était constitué d’écorces de tronc de V. conferta récoltées dans la région du Centre, département de la Mefou et Afamba, localité de Nkolafamba, L’identification du spécimen a été effectuée à l’Herbier National du Cameroun sous le n° 10046. Le matériel a été nettoyé, séché durant 14 jours à l’abri du soleil, puis pulvérisé dans un broyeur mécanique. L’extraction a été faite par double macération de 72h dans 11 L de MeOH de la poudre d’écorces de V. conferta. Le mélange a été filtré sur du papier filtre Whatman N°3, le filtrat concentré à l’évaporateur rotatif Heidolph® (Hei-VAP ML/G3). L’extrait sec a été conservé à température ambiante à l’abri du soleil. Le criblage phytochimique qualitatif a été réalisé en utilisant les protocoles standards d’Harbonne de 1998. Pour l’isolement et la caractérisation des molécules, l’extrait brut a été dissout dans du MeOH et fixé sur une quantité équivalente de silice (de granulométrie 60 – 200μm / 60A) puis séché à température ambiante. Le mélange a été ensuite séparé sur une colonne chromatographique ouverte éluée au système de solvants n-hexane/AcOEt à des polarités croissantes. La composition qualitative des fractions recueillies a été déterminée à l’aide de la CCM. L’élucidation des structures des composés isolés a été faite grâce aux méthodes de RMN 1H et 13C. L’évaluation de l’activité antimicrobienne a été réalisée par la détermination des CMI et CMB. Pour les CMI, les tests ont été faits en triplicate dans les microplaques stériles de 96 puits. Cinq dilutions d’ordre 2 ont été réalisées (de 50 μg /mL à 1,56 μg/mL). L’incubation a été faite pendant 24 h à 37 °C (bactéries) et à 28 °C (fungi). La croissance des microorganismes a été observée grâce à un indicateur coloré l’iodonitrotétrazolium qui virait au rose en présence de bactéries viables. La CMI est la plus faible concentration à laquelle l’extrait a empêché la croissance visible des bactéries et fungi. L’activité de l’extrait a été classé en : i) très forte, CMI ≤ 5 μg/mL ; ii) forte, 5 μg/mL ≤ CMI ≤ 50 μg/mL ; iii) modérée, 50 μg/mL ≤ CMI ≤ 325 μg/mL et iv) faible, CMI> 325 μg/mL Concernant les CMB, L’ensemencement a été effectué à partir des puits de CMI, sur les géloses Muller Hinton e et Sabouraud et l’incubation s’est faite à 37 °C pendant 24 h (bactéries) et 28 °C (champignons). La CMB/CMF est la plus petite concentration à laquelle l’extrait a empêché la croissance visible des microorganisemes après repiquage. L’effet de l’extrait a été déterminé par le rapport CMB ou CMF/CMI : ˂ 1, «bactéricide/fongicide absolu», ≤ 4, «bactéricide/fongicide», > 4, «bactériostatique /fongistatique». Résultats : le rendement d’extraction a été de 2,66%, les composés phénoliques et terpénoïdes ont été révélés. Un mélange de β‐sitostérol et de stigmastérol, ainsi que l’acide bétulinique, ont été isolés. L’extrait méthanolique a montré une forte activité antibactérienne sur les souches de S. aureus et E. coli avec une CMI de 1.25 µg / ml et une très forte activité antifongique sur la souche de C. albicans avec une CMI de 0,78 µg / ml, de plus l’effet a été bactéricide et fongistatique. Conclusion : ces résultats démontrent que l’extrait méthanolique d’écorces de V. conferta présente des propriétés antimicrobiennes.

Keywords

• Vernonia conferta ; activité antimicrobienne ; β‐sitostérol ; stigmastérol ; acide bétulinique