Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban (Jan 2020)
CircRNA_100395通过结合miR-144-3p抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达
Abstract
【目的】研究环形 RNA circRNA_100395 调节心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的作用机制。【方法】CircRNAs 表达谱芯片分析结合实时荧光定量 PCR 验证 circRNA_100395 在长期持续性房颤（AF）病人左心耳组织中的表达。检测血管紧张素Ⅱ（Ang-Ⅱ）诱导人心房肌成纤维细胞（HAFs）中circRNA_100395 的表达及在细胞核质中分布情况。利用放线菌素D 实验检测circRNA_100395 的RNA 稳定性。制备重组circRNA_100395 腺病毒（rAd-circRNA_100395）并感染 HAFs，检测 HAFs 中纤维化相关基因 Col1a1、Col3a1 和 Acta2 的 mRNA 和蛋白表达。通过双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down 实验分别鉴定circRNA_100395 与微小RNA miR-144-3p 的结合作用。【结果】Masson 染色结果显示 AF 病人心耳组织的纤维化明显加重（P < 0.01）。CircRNA_100395 在AF 患者心耳组织中表达降低（P < 0.05），但在Ang-Ⅱ诱导的HAFs 中表达明显升高（P < 0.05），且主要分布于HAFs 细胞质内。放线菌素D 实验证明 circRNA_100395 的 RNA 稳定性明显高于其宿主基因 KLHL20 mRNA。过表达circRNA_100395 抑制 HAFs 中纤维化相关基因表达。双荧光素酶报告基因实验和 RNA Pull-down 实验均证实circRNA_100395 与miR-144-3p 存在特异性的结合作用。CircRNA_100395 可抑制miR-144-3p 促HAFs 中纤维化相关基因表达的作用。【结论】CircRNA_100395 通过特异结合miR-144-3p 来发挥抑制纤维化相关基因表达的作用。
