人脐带间充质干细胞对感染状态下人肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

Abstract

【目的】探讨人脐带间充质干细胞（hUCMSC）对感染铜绿假单胞菌（PA）状态下人肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549）的 影响。【方法】人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549（1×10 5 /mL）2 mL与PA（3×10 4 CFU/mL）2 mL共培育6 h后，加入hUCMSC（1×10 6 / mL）2 mL为实验组，加入等量磷酸缓冲液（PBS）为感染组，A549与PBS及培养基共培育为对照组。比较组间A549细胞形态 学改变（透射电镜），A549细胞存活率（CCK-8新型细胞增殖检测试剂盒），A549细胞凋亡率（Annexin V-FITC/PI双染色流式 细胞仪）以及A549肺表面活性物质A（SP-A）表达量（Western Blot）。【结果】电镜细胞形态学观察显示，感染组A549细胞受 损明显，胞质出现空泡变性，染色质高度凝集，可见凋亡小体；实验组细胞包膜结构完整，核膜完整，核仁明显，核染色质电 子密度低，染色质均一，未见凋亡小体；对照组A549 细胞结构完整，细胞膜表面微绒毛丰富，核膜完整，核周间隙结构正常， 染色质均一；感染组与对照组相比，感染组A549细胞细胞存活率显著降低［（70.35±2.89）%与（97.37±2.07）%，n=3，P<0.01］， 凋亡率显著增加［（8.63%±0.16）%与（2.55±0.11）%，n=3，P<0.01］，SP-A表达显著降低［（0.105±0.01）与（0.232± 0.015），n=3， P<0.01］；实验组与感染组相比，实验组细胞存活率显著增加［（85.69±3.07）%与（70.35±2.89）%，n=3，P<0.01］，凋亡率显著下 降［（6.34±0.12）%与（8.63±0.16）%，n=3，P<0.01］，感染组中，PA 可能损伤 A549 细胞，使其 SP-A 表达量著减少（n=5，P< 0.05），实验组中，hUCMSC可能对感染后A549细胞的保护作用，其SP-A表达量增加（n=5，P<0.05）。【结论】hUCMSC能抑制 感染状态下的A549细胞凋亡，保护A549细胞分泌SP-A。

Keywords

• 人脐带间充质干细胞;人肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549）;细胞凋亡;SP-A